elisa實驗：樣本采集和保存問題

　　一、不同類型樣本的采集要點

　　血清樣本?：靜脈采血后室溫靜置1小時，4℃下2500rpm離心10分鐘取上清，全程避免溶血，紅細胞釋放的過氧化物酶會造成非特異性顯色，干擾HRP標(biāo)記的ELISA結(jié)果。

　　血漿樣本?：采血后30分鐘內(nèi)冰上分離血漿，優(yōu)先選用EDTA作為抗凝劑，避免肝素抗凝，抗凝不全會因纖維蛋白原干擾產(chǎn)生假陽性。

　　尿液/腦脊液等樣本?：用無菌容器收集，4℃下2500rpm離心10分鐘去除沉淀，樣本需避免經(jīng)血、陰道分泌物污染。

　　細胞上清/組織樣本?：細胞上清直接收集后離心去除細胞碎片;組織樣本需液氮速凍，后續(xù)勻漿后離心取上清檢測。

　　二、樣本的規(guī)范保存條件

　　24-48小時內(nèi)檢測：可置于2-8℃環(huán)境暫存，避免長時間放置導(dǎo)致蛋白聚合加深本底。

　　1周內(nèi)檢測：分裝后凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融會造成蛋白降解，細胞上清類樣本凍融1-2次后就可能無法用于檢測。

　　長期保存：分裝后置于-70℃環(huán)境，可穩(wěn)定保存6個月以上，分裝時按單次檢測量分份，避免多次開蓋污染樣本。

　　三、關(guān)鍵注意事項

　　樣本采集后需盡快處理，避免細菌污染，菌體自帶的內(nèi)源性HRP會引發(fā)假陽性結(jié)果。

　　冷凍樣本復(fù)溶后需輕柔混勻，若出現(xiàn)沉淀需再次離心澄清后再檢測，避免雜質(zhì)干擾反應(yīng)體系。

　　提前預(yù)估樣本用量，準備2-3倍于單次檢測的體積，預(yù)留重復(fù)樣的余量，避免樣本量不足導(dǎo)致實驗中斷。

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