T6P科研檢測試劑盒的使用說明
T6P科研檢測試劑盒多為植物海藻糖-6-磷酸ELISA試劑盒,僅供科研使用,以下是通用操作說明:
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
試劑平衡?:試劑盒從2-8℃冷藏環(huán)境取出,室溫平衡20分鐘,濃縮洗滌液若有結(jié)晶,40℃水浴溶解后再稀釋使用。
自備器材?:需準(zhǔn)備酶標(biāo)儀、37℃恒溫箱、移液器、吸水紙、蒸餾水等配套設(shè)備。
樣本處理?:植物組織稱取0.1g,加1mL提取液冰浴勻漿離心取上清,短期2-8℃保存不超過48小時(shí),長期分裝后-20℃凍存,避免反復(fù)凍融。
二、標(biāo)準(zhǔn)操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品配制?:凍干標(biāo)準(zhǔn)品加1mL稀釋液復(fù)溶,靜置10分鐘后做系列梯度稀釋。
加樣?:標(biāo)準(zhǔn)孔加50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,樣本孔先加40μL樣本稀釋液,再加10μL待測樣本,空白孔不加樣本和酶標(biāo)試劑。
溫育?:封板膜密封后,37℃恒溫箱孵育60-120分鐘,之后棄液拍干,洗板5次,每次浸泡1分鐘。
顯色終止?:每孔加入HRP標(biāo)記檢測抗體100μL,再次溫育洗板后,加TMB底物液100μL,37℃避光孵育15分鐘,加50μL終止液終止反應(yīng)。
讀數(shù)?:15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定各孔OD值。
三、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、對應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣本OD值代入曲線方程,乘以樣本稀釋倍數(shù),即可得到樣本中T6P的實(shí)際濃度。
四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
樣本不可含疊氮鈉(NaN?),否則會(huì)抑制HRP活性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失效。
建議設(shè)置復(fù)孔,標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2需≥0.95,保障結(jié)果可靠性。
不同品牌試劑盒組分存在差異,需以對應(yīng)產(chǎn)品的說明書為準(zhǔn)。
注:以上科研產(chǎn)品資料供參考,具體可咨詢技術(shù)老師!
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