使用目的： 本試劑盒用于測(cè)定植物組織，細(xì)胞及相關(guān)液體樣本中百合斑駁病毒(LMoV)表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中百合斑駁病毒(LMoV)表達(dá)。用純化的百合斑駁病毒(LMoV)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中百合斑駁病毒(LMoV)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的百合斑駁病毒(LMoV)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中百合斑駁病毒(LMoV)的存在與否。 試劑盒組成 標(biāo)本要求 1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2.不能檢測(cè)含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同) 2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻， 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此 重復(fù)5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘. 10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 11.測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 計(jì)算和結(jié)果判定： 試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.20 臨界值(CUT OFF)計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為百合斑駁病毒(LMoV)陰性 陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為百合斑駁病毒(LMoV)陽(yáng)性 。 注意事項(xiàng) 1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5.底物請(qǐng)避光保存。 6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm 7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須 注意安全。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存：;2-8℃。 2.有效期：6個(gè)月 注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說(shuō)明，可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。
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