微生物乙酰乙酰輔酶A(AA-CoA)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書?

　　BS-0029-WA微生物乙酰乙酰輔酶A(AA-CoA)ELISA科研試劑盒

　　BS-0029-WB微生物乙酰乙酰輔酶A(AA-CoA)ELISA科研試劑盒

　　版本：2025.10?

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)微生物樣本中的AA-CoA濃度。預(yù)包被抗AA-CoA抗體的微孔板中依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品，與生物素標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物，經(jīng)HRP-鏈霉親和素催化TMB顯色，450nm測(cè)定吸光度(OD值)，濃度與OD值呈正比?。

　　二、試劑組成?

　　組分 規(guī)格(48T/96T) 保存條件

　　預(yù)包被微孔板 1×8條/12條 2-8℃(避光)

　　AA-CoA標(biāo)準(zhǔn)品 1瓶(凍干) -20℃

　　生物素標(biāo)記抗體 1瓶(60μL) -20℃(避光)

　　HRP-鏈霉親和素 1瓶(60μL) -20℃(避光)

　　TMB顯色液 1瓶(11mL) 2-8℃(避光)

　　終止液(2M H?SO?) 1瓶(6mL) 室溫

　　注：其余緩沖液(洗滌液、封閉液等)詳見試劑盒內(nèi)說(shuō)明書。

　　三、樣本處理?

　　微生物培養(yǎng)液?：

　　離心(3000g，10min)收集上清，0.22μm濾膜除菌?。

　　若濃度過高，用PBS稀釋(建議1:5~1:10)。

　　菌體裂解液?：

　　超聲破碎(冰浴，功率200W，3s/間隔10s，重復(fù)30次)?。

　　離心(8000g，4℃，10min)取上清?。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線制備?：將標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(0.5~20 U/mL)。

　　加樣?：每孔加入50μL樣本/標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育1h?。

　　洗滌?：棄液后拍干，PBST洗滌3次(每次30s)?。

　　顯色?：加入100μL TMB底物，避光孵育15min。

　　終止?：加入50μL終止液，30min內(nèi)測(cè)OD450?。

　　五、數(shù)據(jù)分析?

　　濃度計(jì)算?：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程(y=ax+b)計(jì)算樣本濃度?。

　　靈敏度?：0.19 ng/mL(檢測(cè)限)?。

　　六、注意事項(xiàng)?

　　避免反復(fù)凍融樣本，分裝后-80℃保存。

　　溶血或高脂樣本需離心處理。

　　不同批次試劑不可混用。

　　注意：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒

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