elisa試劑盒樣樣本收集方法

　　ELISA檢測的樣本收集需要根據(jù)樣本類型做差異化處理，核心要求是去除雜質(zhì)、避免蛋白降解，保證檢測結(jié)果準確，以下是不同類型樣本的標準收集方法：

　　一、液體樣本收集方法

　　1. 血清

　　用無熱原無菌試管采集靜脈血，室溫放置10分鐘~2小時自然凝固(低溫環(huán)境可4℃靜置過夜)，2-8℃條件下以5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，仔細收集上清后立即檢測;若需保存，分裝后置于-20℃或-80℃冷凍，嚴禁反復(fù)凍融。

　　注意：收集過程需避免溶血和細菌污染，否則會導(dǎo)致非特異性顯色，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

　　2. 血漿

　　根據(jù)試劑盒要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，采集血液后30分鐘內(nèi)輕輕混合均勻，2-8℃、5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，收集上清后立即檢測或分裝凍存。

　　注意：檢測前需核對試劑盒說明書，部分試劑盒對抗凝劑有特殊要求。

　　3. 尿液/腦脊液/細胞培養(yǎng)上清

　　尿液：用無菌管收集新鮮中段尿，2-8℃、5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取上清檢測或凍存，出現(xiàn)沉淀需再次離心;

　　腦脊液：腰椎穿刺無菌采集后，相同條件離心取上清，避免混入血液污染;

　　細胞培養(yǎng)上清(檢測分泌蛋白)：無菌收集上清，離心去除細胞碎片后即可檢測，凍存要求同血清。

　　二、固體/組織樣本收集方法

　　1. 組織勻漿

　　切割新鮮組織標本，稱取1g組織后加入9ml pH7.2-7.4的預(yù)冷PBS，手工或用勻漿器充分勻漿(植物組織需在液氮中研磨)，2-8℃、5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，收集上清分裝，一份待測其余凍存。

　　2. 細胞內(nèi)蛋白樣本

　　懸浮細胞?：4℃下1000-2000×g離心10分鐘收集細胞，按10?個細胞加300-500μL勻漿介質(zhì)的比例添加試劑，機械破碎后離心取上清;

　　貼壁細胞?：吸去培養(yǎng)液后用PBS清洗，細胞刮刮下細胞收集懸液，后續(xù)處理和懸浮細胞一致;

　　處理推薦用物理破碎(反復(fù)凍融、超聲)，避免化學裂解液引入雜質(zhì)干擾檢測，若必須用化學法，需透析去除去污劑后再檢測。

　　三、通用保存要求

　　樣本需澄清透明，必須離心去除沉淀物或懸浮物，ELISA僅能檢測可溶性蛋白，雜質(zhì)會干擾結(jié)果;

　　-20℃或-80℃保存的樣本需在1-6個月內(nèi)完成檢測，4℃保存的樣本需在1周內(nèi)檢測，避免蛋白降解;

　　所有樣本都需要分裝保存，嚴禁反復(fù)凍融，凍存樣本檢測前需緩慢恢復(fù)至室溫，禁止加熱融解。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

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